马蹄形氧合酶-2抑制剂塞来昔布对人肝癌细胞侵袭转移能力的影响

摘要：目的探讨外环氧合核糖体-2可抑制塞来昔布对人肝癌SMMC-772l蛋白来袭移到灵活性的不良影响，为塞来昔布在诊断上放射治疗肝透过有系统。原理广泛应用人体内蛋白人才高效数万人人才人肝癌蛋白株SMMC-7721，并以修复接合处的来袭试制、趋化青年运动试制、对层粘连蛋白的表层试制以及破损刮甩科学研究者掩蔽多种不同溶解度塞来昔布对人肝癌SMMC-7721蛋白来袭、移到灵活性的不良影响。结果塞来昔布作运用于人肝癌SMMC-7721蛋白后，其蛋白吸附数万人突出减少，而青年运动可抑制数万人及来袭可抑制数万人突出下跌，与IgG相对于反之亦然别大多有社会学内涵，且塞来昔布溶解度与蛋白吸附数万人，青年运动可抑制数万人及来袭可抑制数万人大多有依赖性。结论外环氧合核糖体-2可抑制塞来昔布能突出可抑制人肝癌SMMC-7721蛋白的吸附、青年运动及来袭灵活性，故可阻抑肝癌蛋白的移到，可能是防治肝癌住院的关键性候选类固醇之一。

肝癌的来袭移到是引发肝癌患儿病情住院和死亡的主要原因。积极探索阻断肝癌来袭移到的有效途径，踏入大幅度降低其死亡数万人的日后。随着外环氧合核糖体-2(COX-2)在发生之前关键性地位的表明，COX-2可抑制能否运用于诊断放射治疗肝癌仍要随之踏入研究者的焦点。本研究者以人体内人才的人肝癌蛋白株SMMC一7721为；也。掩蔽COX-2可抑制塞来昔布对人肝癌SMMC一7721蛋白来袭灵活性的不良影响。赞扬塞来昔布运用于诊断肝癌放射治疗的必要性。为其诊断广泛应用透过理论基础和原理学依据。

1 工艺和原理

1.1工艺

人肝癌蛋白株SMMC一7721、NIH／3T3蛋白株由本科学研究者三楼复原，塞来昔布为辉瑞该公司厂家，Boyden的大购自Millipore该公司。人才尿液GIBCORRL该公司厂家，胎牛毒素杭州四季青生物该公司厂家，核糖体标仪BIORAD该公司厂家。Matrigel(人工接合处胶)购自BD该公司

1.2蛋白人才和药品盐酸

人肝癌SMMC-7721蛋白株，人体内传代人才，用含10％胎牛毒素(FBS)的RPMI 1640人才尿液，放于37℃、5％CO2蛋白人才箱之前人才48 h，每24 h换人才尿液1次。待人才瓶底铺肝癌蛋白后，弃去人才尿液，用0.25％甲醛消化SMMC-772l肝癌蛋白，含10％胎牛毒素的RPMI 1640人才尿液变动蛋白溶解度为lxl06／ml。合对总共开花蛋白运用于科学研究者。将塞来昔布吸湿性灭菌的DMSO，塞来昔布存放尿液溶解度共五20、60、100μmol/L，的工作尿液，原设0μmol/L为对应。

1．3 SMMC-7721蛋白与刚的吸附科学研究者

以每孔50 μg/mL FN盐酸40μl大块96孔蛋白人才刷。4℃下避光旅店。合lxl06/ml的SMMC-7721人肝癌蛋白施打于已大块FN的96孔人才刷之前。每孔100μl，原设5个复孔。CDC将塞来昔布溶解度为20、60、100μmol/L 3个药物第三组加人，不科西来昔布为IgG，以人才尿液代替SMMC-7721蛋白原设为空白IgG。放于37℃、5％CO2饱和湿度下的人才箱内幼鸟2 h。暂停执行后，PBS盐酸冲洗两遍，投身100μl/孔0．5％固体紫染尿液，染10min。PBS盐酸冲洗4次，37℃湿润，每孔投身1％醋酸硫酸100μl，混匀后静置10 min。在核糖体联仪nm570nmnm处量度各孔吸光谱值(OD)，按下列等式算出蛋白吸附可抑制数万人：可抑制数万人(％)=1-(CDCOD-空白IgGOD)/(IgGOD-空白IgGOD)x100％。

1．4蛋白的移入科学研究者(破损刮甩科学研究者)

将对总共开花SMMC-7721人肝癌蛋白施打于12孔人才刷之前，逐步形成蛋白单层。用移尿液器滴头沿人才刷下部长方形“一”字形污垢单层人才蛋白,镜下记录污垢区内相对靠近，换上体积分总共为1％胎牛毒素的RPMI1640人才尿液,人才24 h换上体积分总共为10％胎牛毒素的RPMI 1640人才尿液，在此期数间人才48h，掩蔽并光学仪器。每第三组平行4个样本。科学研究者重复3次。

1．5蛋白来袭科学研究者

概要Albini等[2]所用原理，将作为物理化学趋酸盐的NIH3T3蛋白人才上清尿液0.2 ml投身Boyden的大的下三楼，在上下三楼两者之数间用孔径8μm的塑料特罗斯季亚涅齐滤膜分开，该膜定时铺成Madrigel盐酸40μl(含Matrigel 120μg)，并在37℃聚合30 min以修复接合处。将含溶解度共五20、60、100μmol/L的蛋白悬尿液200μl加到Boyden上三楼之前，在37℃、5％C02人才箱幼鸟6 h后合出滤膜，甩尽膜上Matrigel及不曾穿行的蛋白。甲醇固定1min，HE染。200倍显微镜显微镜下随机记总共5个视野穿行塑料膜的蛋白总共，合大多值，结果以可抑制数万人透露。原设不科西来昔布为IgG，每第三组原设5个平行Boyden小塞。可抑制数万人=[(IgG穿膜蛋白总共-CDC穿膜蛋白总共)／IgG穿膜蛋白总共]x100％。

1．6蛋白人体内青年运动科学研究者

塑料特罗斯季亚涅齐滤膜定时不铺成Madrigel盐酸，其余同蛋白人体内来袭科学研究者。

1．7社会学执行

所有总共值大多以大多总共±标准反之亦然透露，第三组数间反之亦然异相当采用t检验。P

2 结果

2．1塞来昔布对SMMC-7721与FN吸附的不良影响(此表1)

此表1 塞来昔布对SMMC-7721蛋白与FN吸附可抑制数万人的不良影响（%）*透露各CDC数间相当P

人肝癌蛋白SMMC-7721与纤连蛋白两者之数间吸附力不强，塞来昔布效用2 h后。蛋白吸附灵活性突出减少。各药物第三组与IgG相相当，反之亦然异大多有不确定性(p

2．2塞来昔布对SMMC-7721蛋白移入的不良影响

破损刮甩科学研究者揭示，IgG蛋白污垢区内72 h着有大量蛋白进入，而塞来昔布第三组的蛋白移入却不突出(绘出1)，提醒塞来昔布对肝癌蛋白的移入有突出的可中枢神经。

绘出1 破损刮甩科学研究者测定蛋白移入灵活性A：IgG；B：塞来昔布执行第三组

2．3塞来昔布对SMMC-7721蛋白来袭、青年运动灵活性的不良影响(此表2)

科学研究者各药物第三组与IgG对蛋白来袭、青年运动灵活性的不良影响相当，蛋白来袭、青年运动个总共及可抑制数万人反之亦然异有着不确定性内涵(P

*透露各CDC数间相当及CDC与IgG相当P

3 讨论

来袭移到是关键性的生物物理化学特征，也是放射治疗之前陷于的远超过的难题和保健重点。Liotta等[3]指出恶性来袭的三步学说，第一步蛋白与蛋白外基质(ECM)表层；第二步蛋白本身或诱导宿主蛋白分泌蛋白水解核糖体降解基质；之前一步即趋化内皮细胞的蛋白青年运动和移入。

近几年来研究者推测，COX-2在多种肠道之前过透露[4、5]，且与肝细臌癌的发生、发展和病状关连密切。Koga[6]等测定44事例切除切除的HCC其第三组织与癌旁非癌其第三组织及7事例仍要常肝其第三组织之前COX-2的透露，结果推测低同化的HCC较低同化的HCC或癌旁非癌其第三组织COX-2的透露突出增不强，癌旁非癌其第三组织肝蛋白之前COX-2长方形由此可知在不强透露，仍要常肝其第三组织COX-2长方形弱阳性透露。Kondo等[7]研究者推测，HCC患儿切除切除后,残留肝其第三组织之前COX-2低透露会更进一步癌蛋白更可避免发生微移到而使其再次共存和扩由此可知,引发肝癌的住院，提醒HCC的病状反之亦然，可能与COX-2的低透露有关。Abiru等[8]推测肝蛋白介素(HGF)可以通过促进来袭而加速肝癌蛋白移到，广泛应用类类固醇或NS-398，一种特异性COX-2可抑制，却可以消除HGF对HepG2的这种效用而不不良影响蛋白的共存灵活性。这些研究者结果为功能性COX-2可抑制广泛应运用于肝癌的保健透过了有系统。

本研究者吸附科学研究者暗示，科学研究者各药物第三组塞来昔布对肝癌蛋白与FN吸附数万人与IgG相当，反之亦然异有着不确定性内涵，说明塞来昔布能可抑制SMMC-7721蛋白吸附。此外，在来袭与移到的过程之前，蛋白能够穿行血管、淋巴的接合处才能进入血管和淋巴。达到移到的目的。因此癌蛋白所受趋化因素所趋化并穿行接合处的灵活性是来袭和移到的关键因素所之一。我们采用NIH／3T3上清作为趋化因素所，Matrigel作为人工接合处构建Boyden来袭的大，蛋白吸附于人工接合处后，消化降解接合处并在趋化因素所诱导下穿行接合处，之前附着在滤膜另一面。从而通过计总共蛋白总共反映蛋白来袭灵活性。本研究者暗示塞来昔布对SMMC-7721蛋白来袭、青年运动大多有着可中枢神经。

从以上科学研究者结果我们可以看到塞来昔布对SMMC-7721蛋白的吸附、青年运动、来袭灵活性大多有突出的可中枢神经，从而阻抑蛋白的移到，为诊断上塞来昔布保健肝癌的移到透过了有系统。

参考文献：

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[5]陈莎莉，李星空．双氯芬酸可抑制肝癌蛋白增殖和促进外环氧合核糖体-2mRNA效用的透露[J]．北方医科大学学报，2006，26(6)：814-17．

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[7]Kondo M，Yamamoto H，Nagano H，et a1．Increased expression of COX-2 in nontumor liver tissIIe is associated with shorter disuse-free survival in patients with hepatocellular carcinoma[J]．Clin Cancer Res，1999，5(12)：4005,12．

[8]Abiru S，Nakao k， lchikawa T，et a1．Aspirin and NS-398 inhibit hepatoeyte growth factor-induced invasiveness of human hepatoma cells[J]．Hepatology，2002，35(5)：1117-24．

编辑： 丽芳